EXTRACCIÓN DE ADN GENÓMICO DE HUMANOS

El ADN obtenido es de baja calidad: ↓pureza y el tamaño de los fragmentos. Sin embargo, podemos usarlo para una PCR. Utilizamos reactivos caseros (más barato que le kit comercial).

• El ADN obtenido está contaminado con ARN y proteínas
• La proteinasa K es una proteasa. Sirve para purificar ácidos nucleicos de células animales (que son ricas en proteínas). Procede del hongo Tritirachium album. Gracias a ella, el hongo puede alimentarse de queratina (una de las proteínas más resistentes de la naturaleza). La proteinasa K utilizada es recombinante: el gen de dicha proteína se ha clonado en un vector de expresión, y se está produciendo a gran escala en un hospedador diferente al original (una levadura por ejemplo). Tiene baja especificidad, atacando cualquier enlace peptídico. Tras un cierto tiempo degrada todas las proteínas presentes. Es muy resistente a altas temperaturas y en presencia de detergentes como el SDS. La ↑[salina] de acetato hace que el SDS sea insoluble: turbidez en el tubo. Al precipitar se lleva las proteínas y lo slípidos. En el sobrenadante hay ADNg, ARN y contaminantes de ↓P.M. (aa, nucleótidos, azúcares) solubles.

Ahora hacemos insolubles los ácidos nucleicos para que precipiten. Los contaminantes quedan en solución. Para ello ↑ [salina] de acetato sódico, NaCl, acetato amónicoy se añade un alcohol (etanol, isopropanol). Para lavar usamos etanol 70% → el 30% es de agua y elimina sales disueltas o detergentes que hayan precipitado. El etanol mantiene insoluble el ácido nucleico.